流式细胞实验：细胞荧光染色步骤（间接法）

细胞荧光染色步骤（间接法）
1. 在每个流式检测管或板式微孔中加入50ul的稀释后的一抗（抗体用Staining Buffer稀释成合适的浓度）；在空白管/孔或同型对照管/孔中加入50ul Staining Buffer。若进行抗体最佳浓度测试，建议一抗稀释范围1:50-400。
2. 在各管/孔中分别加入50ul细胞悬液（约106-7细胞），并轻轻混匀。
3. 避光冰浴或在4℃冰箱中孵育20分钟。（注：有些抗体可能需要更长的孵育时间，建议实验者进行预试验摸索）
4. 孵育完成后，加入Staining Buffer（每流式检测管中加2ml，而每微孔中加200ul）
5. 4℃下300-400g离心5分钟，并弃去上清。
6. 重复洗涤过程3次。
7. 重悬细胞后上流式仪检测。 使用的一抗是纯化或生物素标记抗体，则每管/孔加入50-100ul稀释好的荧光标记二抗或荧光标记亲和素,二抗稀释比例，在1:20-200之间，需要做不同的稀释梯度（用Staining Buffer稀释成合适的浓度）后于冰浴或在4℃冰箱中避光孵育15-30分钟。洗涤细胞两次（参考第4步和第5步方法）。之后500ul Staining Buffer重悬细胞，并上机检测。
8. 试验结果分析。 （注：若要对多个细胞表面抗原进行多色标记，则同时加入荧光标记抗体后按以上操作步骤进行孵育和细胞洗涤；操作尽量保持在避光和4℃左右的温度下进行。）
Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

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